《300勇士：帝國崛起》結局中，海上一戰后，波斯大軍損失慘重，他們暫時退兵休養生息，希臘人戰勝了波斯后，雅典城失而復得，他們將薛西斯的王座和棧橋的繩索當成戰利品送給德爾菲神廟，并由德爾斐引出新火種，預示著希臘的重生。

影片的背景設定在著名的馬拉松戰役后，特米斯托克列斯射殺了波斯國王后便被大家奉為希臘英雄，但他此舉也為之后的戰爭埋下禍根，波斯國王去世后，他的兒子薛西斯一世對特米斯托克列斯恨之入骨，一直想殺了他替父親報仇。

在波斯海軍統帥阿特米西亞的煽動下，薛西斯決定出兵進攻希臘，他率領大軍與希臘的領袖列奧尼達及其三百勇士在溫泉關爆發流傳千古的血戰，除了陸戰外，這次大戰的主要場地還發生在海上，阿特米西亞統帥的強大海上部隊漸漸逼近了雅典。

在危急關頭，特米斯托克列斯臨危受命，他帶領希臘的勇士們在海上與阿特米西亞所率領的軍隊展開大戰，波斯士兵中很多人都不會游泳，這場戰役的結果從一開始便早已注定，最后薛西斯和阿特米西亞全都死在了戰場上。